背景聚焦：为何要关注C末端赖氨酸变异体？
电荷异质性是单克隆抗体和融合蛋白类药物的关键质量属性，对药物的稳定性、有效性、免疫原性或药代动力学等具有重要影响。其中，C末端赖氨酸变异体作为碱性峰的主要成分，虽不直接影响药物安全性，但其含量波动会直接影响电荷异质性，同时也反应了工艺制造稳定性和一致性，因此在药物开发和表征中需要进行关注与控制。
解密核心成因：赖氨酸变异体从何而来？
绝大多数IgG抗体重链C末端多以脯氨酸-甘氨酸-赖氨酸（Pro-Gly-Lys）的氨基酸序列结尾，在细胞培养过程中，羧肽酶（以羧肽酶CpB为主）负责切除末端赖氨酸（K），但酶切不完全会导致K0（无赖氨酸）、K1（残留1个赖氨酸）、K2（残留2个赖氨酸）三种变异体共存。由于赖氨酸是碱性氨基酸，不同赖氨酸残留直接改变抗体净电荷，进而形成赖氨酸变异体。 关键酶解机制：羧肽酶B（CpB）分布于CHO细胞内、膜表面及培养上清中，其活性受温度、pH、金属离子等多种因素调控。 三大工艺调控策略：从源头优化质量 一、细胞株选择：宿主细胞的[基因密码] 1、不同宿主细胞对赖氨酸残留影响显著 相同的抗体分子在杂交瘤B细胞中表达C末端以K0, K1和K2三种形式存在，而在CHO细胞中C末端几乎全部为K0形式。 2、不同minipool表达的抗体具有迥然不同的赖氨酸残留 同一抗体在不同pool中赖氨酸残留差异可达4.9%-30.9%，凸显克隆筛选的重要性。 二、培养基优化：微量元素和氨基酸的[精准配比] 1、 Zn2+与Cu2+平衡 培养基中Zn2+作为羧肽酶B的辅助因子能够提高羧肽酶的酶切效率，而高浓度Cu2+抑制Zn2+吸收进而降低Zn2+与羧肽酶B的结合，降低剪切效率。 2、精氨酸和赖氨酸含量 培养基中赖氨酸和精氨酸浓度升高会显著抑制羧肽酶活性，当培养基中赖氨酸和精氨酸含量从2mM增加至10mM时，抗体C端赖氨酸变异体比例从18.7%上升至31.8%。 3、牛磺酸增效 添加牛磺酸能够上调碱性羧肽酶表达和提高细胞外碱性羧肽酶活性，将赖氨酸变异体含量从12%下降至8%，同时减少蛋氨酸和色氨酸氧化，进一步降低碱性峰的比例。
三、工艺参数调控：藏在参数里的[温度魔法]
降低温度 当培养温度从37℃降低至32℃时，羧肽酶B的mRNA转录水平下降35%，酶活性降低，赖氨酸变异体含量增加。
结语：质量源于设计的实践
通过细胞株筛选、培养基组分优化及工艺参数调控，可实现C末端赖氨酸变异体的精准控制。这不仅提升单抗药物的电荷均一性，更为生产工艺的稳定性和规模化生产提供技术保障。
赋成生物工艺平台特色
CHO宿主细胞平台，灵活匹配项目需求
1、野生型CHO K1：经典可靠，适用广泛；
2、CHO K1-AF（岩藻糖敲除）：优化糖基化修饰，提升抗体药物效能；
3、CHO K1-GSKO（GS敲除）：提高筛选效率，快速产生高产克隆。
自主培养基开发，精准调控产品质量
1、平台化培养基矩阵，涵盖种子复苏、扩增和生产培养基，蛋白表达量比肩进口品牌；
2、配方开发与高通量优化平台，实现培养基成分层面精准调控质量。
参考文献
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