1、双功能抗体简介
双特异性抗体(bispecific antibody，BsAb)简称双抗，具有两条抗原结合臂，可以结合两个不同的抗原靶点，或相同靶点的不同表位。双特异性抗体可用于研制抗肿瘤，抗自身免疫性疾病以及抗病毒的新一代药物。
双功能抗体主要分为两类：
✔ IgG like：保留了Fc片段，具有Fc介导的抗体效应功能，如ADCC、CDC。代表平台有Knob in hole、SEED、DEKK 、DVD-Ig、DAF、Crossmab 等几十个平台；
2、双功能抗体表达平台
2.1 Knob in hole(KIH)杵臼结构
基于在抗体链的 CH3 区域用一个较大的氨基酸替换一个较小的氨基酸，形成一个“knob”结构，同时在另一条链上以较小的氨基酸替换多个较大的氨基酸形成一个“hole”结构，改变了 Fc 的局部空间结构。杵臼结构设计有利于两种异源抗体重链的正确装配。
赋成生物双功能抗体表达平台为以KIH为基础进行Fab或Fc改造而成，基于KIH的基础分别在Fab端或Fc端增加scFv或纳米抗体，从而达到双抗或多抗靶向及治疗效果。
根据分子结构，可设计单细胞或双细胞表达体系及工艺路线。
✔ 双细胞表达体系：采用半抗分别表达、体外装配的方式。
✔ 单细胞表达体系：采用单细胞表达体系，体内装配，纯化目的蛋白。
2.2特色CD3平台
3、双功能抗体平台的应用 -
双细胞表达平台设计及应用
✔ 双抗设计理念：靶向癌细胞表面HER2受体D2和D4区域的双功能抗体，经过CH3区改造，形成 “杵臼”结构（knob-in-hole）。
✔ 采用特色ADCC增强型宿主细胞分别进行半抗表达，并进行体外装配，形成双功能抗体。
3.1双细胞表达平台的蛋白表达及质量属性
3.2 In vitro study
3.3 In vivo efficacy testing
✔ 在不同小鼠荷瘤模型中，BsAb01的肿瘤抑制效果明显高于同靶点单抗。
4、双功能抗体平台的应用 -
单细胞表达平台设计及应用
✔ 双抗设计理念：scFv通常由一个VH、一个VL、以及介于中间的接头构成，BsAb02在VL的C末端进行结构改造（单链抗体scFv片段包含重链可变区、接头和k轻链可变区）。同时在CH3区改造，形成 “杵臼”结构（knob-in-hole）。
✔ 最终分子结构：Fab-Fc(G1)×scFv-Fab-Fc(G1)。其中Fab-Fc(G1)部分为Target1半抗体，scFv-Fab-Fc(G1)部分为Target1 scFv与anti-CD3 Fab-Fc的重链N端连接组成的半抗体，双特异抗体Fc端为杵臼结构设计。
4.1单细胞表达平台的蛋白表达及传代稳定性评估
✔ BsAb02表达量约为4.71 g/L-5.64 g/L；
✔ 细胞经过30 passages 传代（>100PDL), 抗体关键质量属性未发生显著变化。
✔ SEC纯度>83%（一步亲和）；nrCE-SDS和电荷异构基本一致；N-glycans分布基本一致；生物学活性基本一致。
参考文献
1、 Ma J, Mo Y, Tang M, Shen J (2021) .Bispecific Antibodies: From Research to Clinical Application. Front. Immunol. 12:626616.
2、 双特异性抗HER2抗体（CN 109715671 B）
